X33酵母感(gan)受態細胞(bao)

X33酵母感(gan)受態細胞(bao)操(cao)作(zuo)說(shuo)明(ming)：

1、取(qu)需轉化(hua)質粒5µg，酶(mei)切，回收；

2、取(qu)壹(yi)支無(wu)菌(jun)的1.5ml EP管，依次加入預(yu)冷(leng)的線性質粒(li)1-5µg（體(ti)積(ji)不高於(yu)15µl），酵母促(cu)轉化(hua)劑(ji)10µl，100µl冰上融化(hua)的感(gan)受態細胞(bao)，畢(bi)赤酵母轉化(hua)液500µl，輕輕翻轉混勻6-8次(ci)；

3、30℃水(shui)浴30min，每15min輕輕翻轉混勻6-8次(ci)；

4、每支加(jia)入20µl的二(er)甲(jia)基亞(ya)碸(feng)；（用於(yu)提(ti)高轉化(hua)效率(lv)，也可(ke)不做）

5、42℃水浴(yu)15min，每7.5min輕輕翻轉混勻6-8次(ci)；

6、12000rpm瞬(shun)時(shi)離心棄上清，每支加(jia)1ml的YPGPlus（或YPG）於(yu)30℃復(fu)蘇1h；（用於(yu)提(ti)高轉化(hua)效率(lv)，也可(ke)不做）

7、12000rpm瞬(shun)時(shi)離心棄上清，用(yong)100µl 0.9%NaCl重懸(xuan)，塗(tu)板(ban)，30℃培(pei)養3-7d。

X33酵母感(gan)受態細胞(bao)註(zhu)意(yi)事項：

1、使(shi)用(yong)酵母促(cu)轉化(hua)劑(ji)前，請(qing)把裝(zhuang)有(you)酵母促(cu)轉化(hua)劑(ji)的管子在沸水(shui)中(zhong)煮(zhu)沸5min，然後(hou)立(li)即放在冰(bing)上，用後(hou)放在-20℃儲(chu)存備(bei)用。

2、轉化(hua)液低(di)溫(wen)環(huan)境(jing)下會析(xi)出(chu)，請(qing)於(yu)常(chang)溫(wen)下溶解後(hou)使(shi)用(yong)。

3、轉化(hua)全程(cheng)要(yao)無菌(jun)操(cao)作(zuo)。