GS115酵母(mu)感受(shou)態(tai)細胞(bao)

GS115酵母(mu)感受(shou)態(tai)細胞(bao)操(cao)作說(shuo)明：

1、取(qu)需轉化(hua)質(zhi)粒(li)5µg，酶切(qie)，回收；

2、取(qu)壹(yi)支無(wu)菌的1.5ml EP管(guan)，依(yi)次(ci)加入(ru)預(yu)冷(leng)的線性(xing)質(zhi)粒(li)1-5µg（體積不高於15µl），酵母(mu)促(cu)轉(zhuan)化(hua)劑10µl，100µl冰(bing)上(shang)融(rong)化(hua)的GS115感受(shou)態(tai)細胞(bao)，畢赤酵母(mu)轉(zhuan)化(hua)液(ye)500µl，輕輕(qing)翻轉(zhuan)混勻(yun)6-8次(ci)；

3、30℃水(shui)浴30min，每(mei)10min輕輕翻轉(zhuan)混勻(yun)6-8次(ci)；

4、每(mei)支加入(ru)20µl的二(er)甲(jia)基亞(ya)碸；

5、42℃水(shui)浴15min，每(mei)5min輕輕翻轉(zhuan)混勻(yun)6-8次(ci)；

6、12000rpm瞬時(shi)離心棄(qi)上(shang)清(qing)，每(mei)支加1ml的YPGPlus（或YPG）於30℃復蘇1h；

7、12000rpm瞬時(shi)離心棄(qi)上(shang)清(qing)，用(yong)100µl0.9%NaCl重(zhong)懸(xuan)，塗(tu)板(ban)，30℃培養48-96h。

GS115酵母(mu)感受(shou)態(tai)細胞(bao)的註意事項：

1、使(shi)用(yong)酵母(mu)促(cu)轉(zhuan)化(hua)劑前(qian)，請把(ba)裝有酵母(mu)促(cu)轉(zhuan)化(hua)劑的管(guan)子在(zai)沸(fei)水(shui)中(zhong)煮(zhu)沸(fei)5min，然(ran)後立(li)即放在(zai)冰上(shang)，用(yong)後放在(zai)-20℃儲存備用(yong)。

2、轉化(hua)液低(di)溫(wen)環(huan)境(jing)下會(hui)析(xi)出，請於常溫(wen)下(xia)溶(rong)解後(hou)使(shi)用(yong)。

3、化全(quan)程要無(wu)菌操作。