SMD1163 酵(jiao)母(mu)感(gan)受(shou)態(tai)細胞(bao)

操作(zuo)說明

1、取需(xu)轉化(hua)質(zhi)粒5µg，酶切，回收；

2. 取壹(yi)支無菌的(de)1.5ml EP管，依(yi)次(ci)加入(ru)預冷(leng)的(de)線(xian)性質粒1-5µg（體積不高(gao)於(yu)15 µl），酵母促(cu)轉化(hua)劑(ji)10µl，100µl冰(bing)上(shang)融(rong)化(hua)的(de)SMD1163感受(shou)態(tai)細胞(bao)，畢(bi)赤酵母轉化(hua)液(ye)500µl，輕(qing)輕(qing)翻轉混(hun)勻6-8次(ci)；

3. 30℃水浴30min，每(mei)15min輕(qing)輕(qing)翻轉混(hun)勻6-8次(ci)；

4. 每(mei)支加(jia)入20µl的(de)二甲基(ji)亞碸(feng)；（用於(yu)提高(gao)轉化(hua)效率，也(ye)可不做）

5. 42℃水浴15min，每(mei)7.5min輕(qing)輕(qing)翻轉混(hun)勻6-8次(ci)；

6. 12000rpm瞬(shun)時離心(xin)棄(qi)上(shang)清(qing)，每支加(jia)1ml的(de)YPGPlus（或YPG）於(yu)30℃復(fu)蘇(su)1h；（用於(yu)提高(gao)轉化(hua)效率，也(ye)可不做）

7. 12000rpm瞬(shun)時離心(xin)棄(qi)上(shang)清(qing)，用100µl 0.9%NaCl重(zhong)懸(xuan)，塗(tu)板，30℃培養3-7d。

註意事(shi)項(xiang)

1、.使(shi)用酵(jiao)母(mu)促(cu)轉化(hua)劑(ji)前(qian)，請把(ba)裝(zhuang)有(you)酵母(mu)促(cu)轉化(hua)劑(ji)的(de)管子在(zai)沸(fei)水中煮(zhu)沸(fei)5min，然後立即(ji)放在(zai)冰(bing)上(shang)，用後放在(zai)-20℃儲(chu)存備用。

2.轉化(hua)液(ye)低溫(wen)環境(jing)下會析(xi)出(chu)，請於(yu)常(chang)溫(wen)下溶解後使用。

3.轉化(hua)全(quan)程(cheng)要(yao)無菌操作(zuo)。