SMD1168 酵(jiao)母(mu)感受(shou)態細胞(bao)

操(cao)作(zuo)說(shuo)明(ming)

1、取需(xu)轉(zhuan)化(hua)質(zhi)粒(li)5µg，酶(mei)切(qie)，回收(shou)；

2. 取壹(yi)支(zhi)無菌的1.5ml EP管，依(yi)次(ci)加入(ru)預冷(leng)的(de)線性質(zhi)粒(li)1-5µg（體(ti)積不(bu)高(gao)於(yu)15 µl），酵(jiao)母(mu)促轉(zhuan)化(hua)劑(ji)10µl，100µl冰(bing)上(shang)融(rong)化(hua)的SMD1168感受(shou)態細胞(bao)，畢(bi)赤酵(jiao)母(mu)轉(zhuan)化(hua)液(ye)500µl，輕輕(qing)翻轉(zhuan)混勻(yun)6-8次(ci)；

3. 30℃水(shui)浴30min，每(mei)15min輕輕(qing)翻轉(zhuan)混勻(yun)6-8次(ci)；

4. 每(mei)支加(jia)入20µl的二甲基(ji)亞碸(feng)；（用於提(ti)高(gao)轉(zhuan)化(hua)效(xiao)率(lv)，也可(ke)不(bu)做）

5. 42℃水(shui)浴15min，每(mei)7.5min輕輕(qing)翻轉(zhuan)混勻(yun)6-8次(ci)；

6. 12000rpm瞬時(shi)離(li)心(xin)棄(qi)上(shang)清(qing)，每(mei)支加(jia)1ml的YPGPlus（或YPG）於30℃復蘇1h；（用於提(ti)高(gao)轉(zhuan)化(hua)效(xiao)率(lv)，也可(ke)不(bu)做）

7. 12000rpm瞬時(shi)離(li)心(xin)棄(qi)上(shang)清(qing)，用100µl 0.9%NaCl重懸，塗板(ban)，30℃培(pei)養(yang)3-7d。

註意事項

1、使(shi)用酵(jiao)母(mu)促轉(zhuan)化(hua)劑(ji)前，請(qing)把裝有酵(jiao)母(mu)促轉(zhuan)化(hua)劑(ji)的管子(zi)在(zai)沸水(shui)中煮(zhu)沸(fei)5min，然(ran)後立(li)即放在(zai)冰(bing)上(shang)，用後放(fang)在(zai)-20℃儲存備用。

2.轉(zhuan)化(hua)液(ye)低溫(wen)環境(jing)下會(hui)析(xi)出(chu)，請(qing)於(yu)常溫(wen)下溶(rong)解後使(shi)用。

3.轉(zhuan)化(hua)全(quan)程要(yao)無菌操作(zuo)。