雙(shuang)抗(kang)混(hun)合(he)液(100X)用(yong)於預防(fang)細(xi)胞(bao)培(pei)養的(de)細(xi)菌(jun)汙(wu)染(ran),特別(bie)是(shi)革(ge)蘭氏(shi)陽(yang)性和陰(yin)性(xing)細菌(jun)的(de)汙(wu)染(ran)。產品(pin)經過濾(lv)除(chu)菌(jun)處(chu)理(li),可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)添(tian)加(jia)到細(xi)胞(bao)培(pei)養液內(nei)。青(qing)黴的(de)含(han)量(liang)為10kU/ml,含(han)量(liang)為10mg/ml.在細(xi)胞(bao)培(pei)養液中推(tui)薦的(de)青(qing)黴的(de)工(gong)作(zuo)濃(nong)度(du)為100U/ml,鏈黴的(de)工(gong)作(zuo)濃(nong)度(du)為0.1mg/ml。即(ji)按照(zhao)100倍稀釋(shi)使(shi)用即(ji)可(ke)。
核心操(cao)作(zuo)要(yao)點(dian)如(ru)下:
壹、配(pei)制與(yu)保(bao)存(cun)
工(gong)作(zuo)濃(nong)度(du):按1:100比(bi)例(li)稀釋(shi)(如(ru)5ml雙(shuang)抗(kang)母液+495ml培(pei)養(yang)基(ji)),終濃度(du)青(qing)黴素(su)100U/ml、鏈黴素(su)0.1mg/ml。
保(bao)存(cun)條(tiao)件(jian):母液需(xu)-20℃避(bi)光(guang)保(bao)存(cun),避(bi)免反(fan)復(fu)凍融(rong)(≤3次(ci));工作(zuo)液需(xu)2周內用(yong)完(wan)。
二、使(shi)用流(liu)程(cheng)
實(shi)驗(yan)前準(zhun)備(bei):徹底清除(chu)舊培(pei)養基(ji),PBS潤洗(xi)後(hou)加(jia)入(ru)預溫(wen)的(de)雙(shuang)抗(kang)培(pei)養(yang)基(ji)。
無菌(jun)操(cao)作(zuo):在超(chao)凈臺(tai)內完(wan)成(cheng),使(shi)用無(wu)菌(jun)移(yi)液器具(ju),開(kai)蓋後優(you)先分(fen)裝母液。
解(jie)凍(dong)與(yu)溶(rong)解:母液需(xu)2-8℃緩(huan)慢(man)解(jie)凍,若(ruo)出(chu)現(xian)結晶可37℃溫(wen)育(yu)20-30分鐘或輕(qing)輕(qing)搖(yao)勻,禁(jin)止(zhi)劇烈(lie)震(zhen)蕩。
註(zhu)意(yi)事項:
避(bi)免汙(wu)染(ran):操作(zuo)全程(cheng)需(xu)無(wu)菌(jun),母液分(fen)裝後使(shi)用,減(jian)少(shao)汙(wu)染(ran)風險(xian)。
濃(nong)度(du)控制:過高(gao)濃(nong)度(du)易致細胞(bao)毒(du)性,需嚴(yan)格按比(bi)例(li)稀釋(shi)。
特殊場(chang)景(jing):
難抑菌(jun)汙(wu)染(ran):改用(yong)含(han)慶大(da)黴素(su)或(huo)兩性(xing)黴素(su)B的(de)三(san)抗(kang)溶(rong)液。
無(wu)血(xue)清(qing)培養:選(xuan)擇(ze)無動(dong)物源成(cheng)分(fen)的(de)合(he)成(cheng)抑(yi)菌(jun)劑(ji)。
流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)術幹(gan)擾:選(xuan)用(yong)無(wu)酚紅(hong)配(pei)方(fang)的(de)雙(shuang)抗(kang)溶(rong)液。